亮點
·成本更低
·可更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量,在后期工業(yè)化具備絕對優(yōu)勢
概述
·逆轉(zhuǎn)錄病毒(retrovirus),又稱為反轉(zhuǎn)錄病毒,是一類RNA病毒,其遺傳信息并非存儲在DNA上,而是在RNA上。不同于其他RNA病毒,逆轉(zhuǎn)錄病毒的RNA不進行自我復(fù)制,進入宿主細胞后,病毒內(nèi)核的逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA,進而合成雙鏈DNA,整合酶將雙鏈DNA整合至宿主細胞染色體DNA上,從而將非病毒基因?qū)爰毎w內(nèi),并可在體外進行有絲分裂將其傳遞給子代細胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒特異性感染分裂期細胞,如胚胎干細胞、神經(jīng)干細胞、造血干細胞及血液內(nèi)的細胞等。在實際應(yīng)用中,逆轉(zhuǎn)錄病毒載體因其轉(zhuǎn)染范圍廣,轉(zhuǎn)染率高,常被用于細胞與基因治療。
·逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(retroviral vector, RVV)是根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄病毒的特性設(shè)計出的一種病毒表達載體。刪除了部分或者全部編碼病毒顆粒結(jié)構(gòu)蛋白的基因,只保留了病毒包裝轉(zhuǎn)導(dǎo)所必須的順式作用病毒序列,以留出更大空間插入外源基因及使病毒部分失活,這使其更易于大片段外源基因的包裝且安全性更高。為了使無復(fù)制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒產(chǎn)生有感染能力的病毒顆粒,深圳細胞谷使用的包裝細胞將提供gag、pol、env基因編碼的病毒結(jié)構(gòu)蛋白,僅需將攜帶外源基因單個質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至包裝細胞株,通過兩步包裝法即可獲得穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)錄病毒細胞株。通過借助表達逆轉(zhuǎn)錄病毒gag,pol外殼/逆轉(zhuǎn)錄酶和env包膜蛋白的包裝細胞株,產(chǎn)生具有感染能力但沒有病毒復(fù)制能力的假病毒顆粒。這種穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)錄病毒細胞株能夠長期生產(chǎn)逆轉(zhuǎn)錄病毒,具有更優(yōu)的批次間的穩(wěn)定性。還能通過單克隆篩選的方法進一步提高逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的滴度,同時實現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的工業(yè)化放大生產(chǎn)。
目前可量產(chǎn)的載體產(chǎn)品示例