來(lái)自西班牙的研究人員在Scientific reports上發(fā)表了題為“Adult peripheral blood and umbilical cord blood NK cells are good sources for effective CAR therapy against CD19 positive leukemic cells”的研究文章。該文章主要研究了來(lái)自成人外周血（AB）和臍帶血（CB）的NK細(xì)胞對(duì)不同靶細(xì)胞的作用，以確定CAR治療的最佳來(lái)源。

一、兩種來(lái)源NK細(xì)胞的體外擴(kuò)增、CD19 CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)情況：

通過(guò)陰性選擇從AB或CB PBMC中分離出NK細(xì)胞，結(jié)果顯示，從CB中分離得到的NK細(xì)胞多于從AB中分離得到的細(xì)胞。兩周后在CB NK細(xì)胞中觀察到略高的倍數(shù)擴(kuò)增，但擴(kuò)增倍數(shù)也較低，2周僅擴(kuò)增2-3倍。 病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后，細(xì)胞存活率都隨著時(shí)間的推移而下降，到第 28天，兩種細(xì)胞來(lái)源的CAR-NK存活率都顯著下降到20%左右。在轉(zhuǎn)導(dǎo)效率方面，AB CAR-NK平均轉(zhuǎn)導(dǎo)效率為47.46%，而CB CAR-NK 轉(zhuǎn)導(dǎo)效率為 46.8%。AB和CB NK細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率之間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。不管是AB還是CB來(lái)源的NK細(xì)胞制備的CAR-NK，深圳細(xì)胞谷制備活率和純度均在90%以上，CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)陽(yáng)性率高達(dá)60~80%，擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)上萬(wàn)倍。

二、兩種來(lái)源的CD19-CAR-NK細(xì)胞在遇到表達(dá)CD19的細(xì)胞后引起脫粒

CD107a表面表達(dá)水平與NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性、細(xì)胞因子分泌之間存在直接相關(guān)性。本研究通過(guò)對(duì)細(xì)胞表面CD107a的表達(dá)來(lái)比較CD19 CAR-NK細(xì)胞與非轉(zhuǎn)導(dǎo)NK細(xì)胞對(duì)表達(dá)CD19細(xì)胞的脫顆粒能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)導(dǎo)或未轉(zhuǎn)導(dǎo)CD19 CAR的AB和CB NK 細(xì)胞在K562存在下表現(xiàn)出類(lèi)似的脫顆?；钚?。在CD19陽(yáng)性細(xì)胞（如Nalm-6、ALL和CLL原代患者腫瘤細(xì)胞）中，AB CD19 CAR-NK細(xì)胞比未轉(zhuǎn)導(dǎo)的AB NK細(xì)胞表現(xiàn)出更高的脫顆?；钚浴B CD19 CAR-NK細(xì)胞比未轉(zhuǎn)導(dǎo)的CB NK細(xì)胞表現(xiàn)出更高的脫顆?；钚?。AB CD19 CAR-NK細(xì)胞相較于CB CD19 CAR-NK細(xì)胞CD107a的表達(dá)略高一點(diǎn)。

三、CD19-CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)的NK細(xì)胞更有效地殺死表達(dá)CD19的細(xì)胞

本研究檢測(cè)了兩種來(lái)源的非轉(zhuǎn)導(dǎo)NK細(xì)胞和CD19 CAR-NK細(xì)胞在不同效應(yīng)靶比下的細(xì)胞毒性活性。AB和CB CAR-NK細(xì)胞比未轉(zhuǎn)導(dǎo)的NK細(xì)胞更好地裂解表達(dá)CD19的靶細(xì)胞。AB CD19 CAR-NK細(xì)胞在10:1比例殺傷Nalm-6的能力、10:1和5:1比例殺傷ALL的能力、1:1比例殺傷CLL細(xì)胞的能力顯著優(yōu)于CB CD19-CAR NK細(xì)胞。另一方面，在10:1和5:1的比例下，CB CD19-CAR NK細(xì)胞裂解CLL細(xì)胞的能力顯著增強(qiáng)?？偨Y(jié)：不管是對(duì)ALL還是CLL原代患者腫瘤細(xì)胞，AB來(lái)源CD19-CAR NK細(xì)胞殺傷能力明顯優(yōu)于CB來(lái)源。

綜上所述，AB CAR-NK細(xì)胞在殺死表達(dá)CD19的靶細(xì)胞方面表現(xiàn)稍好，而CB NK細(xì)胞單位細(xì)胞數(shù)較為穩(wěn)定，可通過(guò)不同的白介素刺激提高體外擴(kuò)增、殺傷活性和存活率。上述實(shí)驗(yàn)說(shuō)明這兩種來(lái)源的CAR-NK細(xì)胞都有其優(yōu)勢(shì)，均可以作為CAR治療的替代和更安全的候選細(xì)胞，都適合未來(lái)臨床應(yīng)用CAR-NK治療血液病。

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